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【周二晚上八點】金開瑞第二季分子互作主題直播首秀-免疫共沉淀技術(Co-IP)
文章來源:genecreate 作者:genecreate 發布時間:2020-10-19 10:33
        蛋白間相互作用是細胞各種基本功能的主要完成者,參與幾乎所有的重要生命活動。因此,蛋白-蛋白相互作用研究以及建立相互作用的關系網絡圖,具有十分重要的意義,也是目前蛋白質研究領域的熱點。
        Co-IP(免疫共沉淀,co-inmunoprecipitation)是經典的利用抗體從樣品中捕獲靶蛋白及其互作蛋白、復合體的一項技術,能夠特異性富集所研究的目的蛋白。由于過程中采用了非變性條件,保留了互作及復合體的細胞內狀態。相對于酵母雙雜交、pull down等方法,其特色之一便是捕獲的蛋白互作發生在所研究的特定組織細胞內,保存了互作蛋白及復合體的“內源”狀態。
Co-IP實驗原理
        以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法,是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。
        當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質X的抗體免疫沉淀X,那么與X在體內結合的蛋白質Y也能沉淀下來。
 Co-IP實驗優勢
a)   取材可以選擇該目的蛋白所在物種、特定組織、細胞,因此CoIP能夠反應該蛋白在天然組織細胞狀態下存在的互作關系蛋白;
b)   找出整個復合體中直接/間接互作的多個蛋白,研究復合體組成;
c)   通過與質譜鑒定連用可以初篩到一系列未知蛋白,再通過其他技術進一步驗證。
 Co-IP實驗注意事項
a)需要特異性IP級別誘餌蛋白抗體(重點);
b)如果沒有特異性抗體,則需要考慮構建重組標簽質粒,用標簽抗體進行CoIP實驗;
c)樣品種類實驗風險:過表達細胞樣品<細胞樣品<動物組織樣品<植物樣品(通常為轉基因植物,標簽抗體也很難達到特異性富集);
d)CoIP-MS風險:由于存在特異性抗體高豐度蛋白,質譜不一定能夠鑒定到誘餌蛋白。
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